2022年11月17日，由中国医学装备协会应用评价分会主办、北京水木济衡生物技术有限公司承办的《体外诊断试剂研发全流程管理培训课》第三期分析性能评价课程正式开课，培训课程持续三天，邀请了多位行业资深专家授课，吸引了上百家企业参加。

培训的最后一天，设置了讨论环节，多位专家就学员提出的问题进行了详细的解答，现将部分问题及专家回复整理如下。

本节主要针对参考物质相关问题。

31咨询问题

国家参考品和国家标准品，对于产品需要执行的强度是不是可以理解为推荐性标准和强制性标准？

专家答复：

个人理解国家标准品和国家参考品，只要适用，注册检验时都应使用。

32咨询问题

定性体外诊断试剂产品，已经买到国家标准品，国家标准品附带的说明书中描述不能用于溯源，原因是什么呢？

专家答复：

国家标准品和国家参考品，主要用途是用于体外诊断试剂质量评价，在原材料选择、制备方法、标定方法、标定结果、定值准确性、量值溯源、稳定性及分装与包装条件等方面都对其有相应的要求。

定性试剂国家标准品或参考品，通常由阳性参考品、阴性参考品、检测限参考品及精密性参考品等组成，分别用于对IVD试剂敏感性、特异性、检出限、精密度等性能的评价。

计量溯源性目前主要针对定量测定，定性测定目前还无法做到溯源，国家标准品或参考品主要用途还是评价结果的一致性。

关于正确度，有国家标准品，但是是人工重组的，和企业的检测系统不匹配，该怎么处理？

专家答复：

国家标准品说明书的“用途”一栏注明了标准品的来源和适用范围。如确实不适用，建议企业可向注册审评审批部门提交说明，充分详述不适用的理由。

34咨询问题

定量检测试剂没有标准品，可以用重组抗原或天然抗原做企业标准品吗？需要溯源到哪里？

专家答复：

这种情况下，可参考ISO 17511：2020版模式6“被测量由制造商内部自定义的参考物质定义，没有一级参考物质和有证参考物质，也没有参考测量程序和一致化方案，不能溯源到 SI单位”。简单地说，企业要自行建立标准。模式6溯源的终点在于企业自定义的参考物质（m3），被测量由这个参考物质定义。m3通常是一些纯品，例如针对抗原检测，m3往往是纯化的重组抗原，采用重量法或免疫分析方法（p4，制造商选定的测量程序）得到制造商工作校准物。

35咨询问题

定量体外诊断试剂产品，没有标准品，采用外购化学合成的标准品，需要提供哪些材料，才可以做溯源用呢？

专家答复：

量值溯源如何做，以及需要提供哪些文件，在ISO 17511：2020版有详细要求。

36咨询问题

产品研制过程中，无国家标准品，采用临床样本制备参考品的注意事项有哪些？具体参考文献有哪些？

专家答复：

企业参考品的用途是全面评价和确认产品的各项性能，发挥“标尺”、“砝码”作用，是IVD研发、生产及应用全过程中进行产品安全有效性评价的必备核心耗材，因此企业参考品设计时应客观合理，应能充分评价产品的质量，帮助发现产品在设计或者生产中的一些缺陷和问题。采用临床样本制备参考品的注意事项：

1）阳性参考品主要评估产品的敏感性，应具有代表性、满足临床样本的分布类型、遗传标记代表性，应包括强阳性参考品、中等阳性参考品、弱阳性参考品，其中应以中等阳性参考品为主。如被测物包括不同的型别及亚型，一般情况下应覆盖；

2）阴性参考品主要评估产品的特异性，阴性参考品除了有不含被测物的正常患者样本外，还应设置一定数量的含有可能会产生交叉反应物质的样本，包括分析物的结构类似物、具有同源性序列的核酸片段、易引起相同或相似的临床症状的其他病原体、采样部位正常寄生或易并发的其他微生物等。建议还应设置干扰评价的参考品，如常见的内源性干扰物质、常用药物及其代谢物、样本添加剂等；

3）在企业参考品的基质选择上，企业参考品的基质应可能与临床被检样本相同或接近（例如血清、血浆、组织切片）。例如，检测血浆中基因突变的试剂评价参考品的设置应根据血浆样本中突变类型分布、片段长度、浓度等进行模拟；

4）企业要建立自己的参考品，并固定化下来。举例来讲，对于定性试剂盒而言，检出限这个指标非常关键，因此检出限参考品的合理设置也就显得尤为重要，但在实际工作中，我们会发现有的企业设置该参考品时不太科学，往往随意选择一个临床的强阳性样本，然后进行倍比稀释，对系列稀释的参考品进行检测，直至检测到结果为阴性，并将上一个稀释度参考品设置为检出限参考品，这样并不能清楚的确定参考品中的被测物的具体浓度（或滴度、效价等），从而也无法保持参考品批次间的一致性。

可参考的文献包括相应审评指导原则的要求、国家标准品和参考品的研制相关论文等。

37咨询问题

体外诊断试剂盒的不同的基因位点的参考品必须都是相同的吗？比如全部都得是来自阳性细胞系或者全部都是阳性病人血样？

专家答复：

要视情况而定。参考品的原材料应尽可能与临床样本相一致或接近，主要来源于临床样本，但也可来源于永生化细胞系、基因编辑细胞系，甚至也可来自基因工程构建产品、重组质粒等。一般情况下建议阳性参考品中常见基因突变位点采用临床样本提取的DNA储备液或细胞系作为原料，其他突变位点可采用DNA储备液、细胞系或突变扩增产物模拟样本作为原料。

38咨询问题

要检测病人中的基因突变位点，尽量用临床样本来进行性能分析，如果临床样本比较难获得可否用带有突变位点的细胞系来作为参考品？ 

专家答复：

可以。

39咨询问题

基因突变位点检测中设置的强阳性参考品中关于强阳应如何定义，浓度如何界定？

专家答复：

强阳性在突变位点的检测中一般是指突变频率比较高的阳性样本，与临床中患者检测出的群体突变频率相关，没有准确的定义，可以根据不同疾病查阅文献来设定。一般情况是直接选择临床样本，不进行人为稀释。

40咨询问题

关于流产物组织染色体拷贝数变异检测试剂盒企业参考品建立中，关于微缺失微重复参考品，只要不影响相关疾病诊断，微缺失微重复的DNA区段和大小不用和国家参考品panel的相应疾病的微缺失微重复的区段完全一致？

专家答复：

一般情况下，需要和国家参考品保持一致。这个项目，还应充分考虑判断依据和临床是否常见的等综合因素，建议咨询相关老师。

41咨询问题

体外诊断定性试剂产品，临床存在了不同耐药类型，有一种药物耐药，也有两种和多种耐药类型，参考品需要包含所有临床耐药类型还是只包含耐药基因突变类型就可以？

专家答复：

一个基因位点发生不同的碱基突变，临床指征相同的耐药，参考品不能只选择1种突变型来代表，还是需要尽可能多的选择。

42咨询问题

对于罕见的型别可以使用细胞株（人类基因检测），怎么定义这个罕见？有可量化的指标来定义“罕见”吗？

专家答复：

要视项目具体情况而定。参考品的原材料应尽可能与临床样本相一致或接近，主要来源于临床样本，但也可来源于永生化细胞系、基因编辑细胞系，甚至也可来自基因工程构建产品、重组质粒等。

本专家解答仅代表专家个人观点，不代表任何机构，不能替代相关法律法规，仅作参考用。

未完待续。