2022年11月17日，由中国医学装备协会应用评价分会主办，北京水木济衡生物技术有限公司承办的《体外诊断试剂研发全流程管理培训课》第三期分析性能评价课程正式开课，培训课程持续三天，邀请了多位行业资深专家授课，吸引了上百家企业参加。

培训的最后一天，设置了讨论环节，多位专家就学员提出的问题进行了详细的解答，现将部分问题及专家回复整理如下。

本节主要针对正确度评价中的比对试验。

21：咨询问题

正确度评价，参考物质、比对试验、回收试验这三种方式选择上有优先级吗？有些项目，尽管有有证参考物质，但是购买不到，可否采用方法学比对的方式？

专家答复

正确度评价有三种方法：

第一种方法是分析具有被测量参考量值的适当参考物质；

第二种方法是基于用患者样品进行方法学比对并估计偏倚，此种偏倚实际上是两种方法之间的系统误差；

考虑到前两种评价方法的可获得性有所限制，因此在有些情况下，可采用第三种方法即回收试验，但要注意的是回收试验评价的不是真正的“偏倚”。

原则上，有可用的参考物质的话，优先采用参考物质进行正确度评价，这种方法也是操作起来最简单、最便捷的方法。当参考物质不能获得时，可采用比对试验。

22：咨询问题

当企业无法获得大量人血清的情况下，可以用其他的血清做实验吗？有推荐的可购买的血清吗？

专家答复

比对试验应尽可能使用临床样品。

若样品量缺少不够用于重复测定或测量区间的某些样品难以获得时，可通过混合、添加、稀释等办法进行处理。处理过程可能会引起样品互换性问题，因此使用处理过的样品应进行标注和记录，建议处理过的样品不超过样品总数的20％。

23：咨询问题

不同的比对试验方案参考的法规或方法不同，结果不同，那我们做出选择时，有哪些较好的判断依据没有?比如什么情况下选择多少例样本，如何判断等?

专家答复

正如培训时老师讲到，比对试验可参考的文件如下。

在进行比对试验，我们考虑的因素包括：

怎样选择目标检测系统（参比方法）？选择多少份标本n＝？选择标本的浓度或浓度范围是多少？每天检测多少批？批间间隔时间？每批检测标本数及检测顺序？共需多少工作日？数据怎样处理？偏倚的判断标准怎样设置？不接受的项目怎样整改？不接受的项目整改后怎样验证？由于参考的文件不同，以上考虑因素也有差异，因此评价结果或结论也有可能不同。

我们一定要基于我们的评价目的（建立性能指标？确认？验证？），选择合适的、最新的、法规认可的方法。

目前，行业内参考较多的是CLSI EP09c Measurement Procedure Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples（用患者样品进行测量方法比对及偏倚估计，2018年）。CLSI EP09c要求样本数量不少于100例。

24：咨询问题

OLR、WLS、Deming、Passing-Bablok四种回归统计方式是否可提供经典案例分析举例，以便更好的理解和应用。或者有没有专门医学统计学与产品结合的分析应用的学习平台，求讲解和推荐。

专家答复

CLSI EP09c的附录给出了这4种模型的公式和案例，另外YY/T 1789.2-2021《体外诊断检验系统 性能评价方法 第2部分：正确度》的附录也给出了这4种回归模型的示例，建议大家仔细学习。

25：咨询问题

待评方法和参比方法统计分析时，Deming和passing-bablok两种回归方法的具体区别是什么？

专家答复

OLR对数据的分布、等方差性等有较为严格的要求，要求因变量与自变量关系为线性、误差服从均数为0的正态分布且方差相等、各观测独立、x无误差等。在医学检验和IVD实际工作中，常常需要比较两种仪器、两种方法或两个不同实验室的测量结果是否相同，由于因变量（y）和自变量（x）都包含测量误差（随机变量），不符合最小二乘回归的假设条件。

因此Deming回归和passing-bablok回归虽然是两种比较小众的回归方法，却在我们这个领域用的比较多。

比对试验，一般情况下，方法间差值混合变化时，可选择Deming回归或Passing-bablok回归。Deming回归在建立y对x的回归方程中，同时考虑x的残差最小和y的残差最小。passing-bablok，相当于把任意的两个点，计算其斜率，如果有4个点，就能计算出6个点的斜率，Passing-bablok回归线的斜率为所有这些斜率的中位数。

比较而言，Deming方法有时不能消除一些差异变化较大数据点的影响，Passing-bablok为非参数方法，统计更宽松，不考虑随机误差有多大。强调的是EP09c要求须先通过散点图、偏差图、柱状图等方法从不同角度联合评价，从而选择最佳回归模型进行拟合分析。

26：咨询问题

r是最小二乘法得到的还是最适合方程得到的呢？

专家答复

方法学比较，在进行回归统计的时候，往往先计算相关系数（r）。

相关系数计算公示如下，r反映了组成这条最小二乘回归直线上所有实验点对于线的紧密程度。r值越大，说明两个方法检测患者样品检测结果间关系密切（密切≠相等，r不是x和y方法结果一致的指标），这时候可以进行回归统计了解两个方法检测数据间的数学关系了。

27：咨询问题

方法比对中，分析质量目标、总误差分析目标、TEa等的设定依据有哪些？

专家答复

1999年斯德哥尔摩会议提出了分析质量指标设定的几种原则和方法：

（1）评估分析性能对临床决定的影响；

（2）检验项目的生物学变异；

（3）已发表的专业建议；

（4）性能目标由监督机构、或室间质量评估计划组织者设定；

（5）现有技术水平能达到的性能水平。

2014年米兰会议重新修订了分析性能指标的“共识声明（Consensus statement）”，由原来的五个等级简化为三个等级，并且增加了注释。

国内一些标准，例如WS/T 403-2012《临床生物化学检验常规项目分析质量指标》，还有医药行业标准（YY标准）中的一些产品标准，都给出了常规项目的变异系数、偏倚、总误差要求。

28：咨询问题

方法学比对实验中，离群值剔除的标准是什么？

专家答复

离群值产生有两种来源:

一是技术错误造成的，即样品错误、测试时的操作错误、仪器故障、计算错误、录入测试结果时的简单书写错误等造成的，这样的离群值可以直接剔除，或剔除后再做实验补数据；

第二种来源是不能用技术错误解释的，产生于试验条件、试验方法等因素的偶然偏离，这时就要进行统计处理来决定离群值是保留还是剔除。离群值的取舍对分析结果会产生很大影响，必须谨慎对待，在离群值产生的原因不明之前，不应简单决定其取舍。

在做离群值检验时，要预先规定检出离群值个数的上限，若检出的离群值个数超过了这个上限时，对这一组测量应做慎重的研究或处理。

EP09c推荐用广义极端学生化偏差(Extreme Studentized deviate, ESD)方法检验离群值，离群值的数量不应超过5%。

29：咨询问题

利用格拉布斯法(Grubbs)检验法检验离群值时，选用EXCEL编辑的公式和MedCalc软件进行统计分析（选取同样的α值），结果不一致，一般是EXCEL显示有离群值，MedCalc软件显示无离群值，请问这个是什么原因导致的?软件选择界面如下：

专家答复

格拉布斯法计算公式应该是一样的，可能用软件的时候是选择了右侧检验而excel可能是双侧检验的原因，建议软件也使用双侧检验试一下。

30：咨询问题

关于数据正态分布的统计判断，S-W和K-S分别参考时机？如果是基于样本量来判断的话，那么在不同样本量分别优先考虑哪种判断方法？

专家答复

通常W检验是小样本量，医学统计中样本量为8-50时使用W（S-W）检验，样本量大于50时使用D（K-S）检验。

不同的统计软件对于W、D检验样本量的使用要求不同，如SAS应该是2000，SPSS可能是5000。

本专家解答仅代表专家个人观点，不代表任何机构，不能替代相关法律法规，仅作参考用。

未完待续。